类固醇激素是一类脂溶性小分子激素,是由胆固醇经一系列酶催化而来。其中包括孕酮、睾酮和肾上腺皮质素等,是身体发育、性成熟及新陈代谢所必须的。人体类固醇激素的升高或者降低与一些临床疾病如先天肾上腺增生、多囊卵巢综合症、肾上腺皮质功能及(3,17和21)羟化酶缺乏症等息息相关。各类固醇激素作为代谢网络中的节点相互影响,如能详尽表征代谢网络上下游中各激素的含量变化情况,对临床疾病的确诊具有种重要意义。而液质联用具有检测灵敏度高,检测迅速,适合高通量测定等优点。因此,建立一种基于液质的可以同时准确测定多种类固醇激素的分析方法,对于临床疾病的诊断具有非常重要的指导意义。
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1、化合物列表
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2、样品前处理
本实验采用SPE固相萃取法对血清中21种激素进行处理,具体步骤如下:
样品预处理:
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取血清样品250 μL,加入内标25 μL
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加入甲醇250 μL,震摇2 分钟
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加入水250 μL,震摇1 分钟
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8000 g离心5分钟,得上清液备用
SPE萃取:
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加载样品:上清液600 μL
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淋洗1:10%乙腈200 μL
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淋洗2:正己烷200 μL
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洗脱:90/10 (v/v) 乙腈/甲醇30 μL
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稀释:洗脱液中加水50 μL,涡旋混匀
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取20 μL进样
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3、色谱条件
色谱柱: Kinect C18 column (2.6 μm, 2.1×100 mm)
A相:水(含0.2 mM NH4F)
B相:甲醇
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